2.1 投喂外源乳酸菌對奶牛瘤胃和十二指腸中活菌比例的影響

如表2所示，在瘤胃中，對照組全天活菌比例呈先升高后降低的變化規(guī)律，于晨飼后11h（20:00）出現(xiàn)峰值；而試驗(yàn)組均無周期性變化規(guī)律；與對照組相比，試驗(yàn)組在08:00、11:00、05:00時(shí)和全天平均活菌比例升高（P<0.05），而在20:00時(shí)，植物乳桿菌組活菌比例有降低趨勢，乳酸菌復(fù)合系組活菌比例則顯著降低（P<0.05）。在十二指腸中，對照組全天活菌比例無明顯周期性變化，也在20:00時(shí)出現(xiàn)峰值；試驗(yàn)組全天活菌比例無明顯變化規(guī)律；與對照組相比，乳酸菌復(fù)合系組活菌比例在17:00升高（P<0.05），而植物乳桿菌組活菌比例在20:00時(shí)顯著降低（P<0.05），植物乳桿菌組出現(xiàn)峰值的時(shí)間推后到02:00時(shí)。

3.1 投喂外源乳酸菌對奶牛瘤胃和腸道活菌比例的影響

本試驗(yàn)中，添加植物乳桿菌和乳酸菌復(fù)合系均可顯著提高瘤胃中活菌比例，但未顯著提高十二指腸中活菌比例，這與Xu等和符運(yùn)勤報(bào)道一致，即飼糧中添加外源益生菌活菌制劑可以提高瘤胃細(xì)菌的數(shù)量，但未改變糞便菌群豐度和多樣性。本試驗(yàn)投喂的外源乳酸菌也增加了瘤胃中活菌的比例，但對腸道細(xì)菌影響不明顯。可能外源乳酸菌本身活菌比例較高，通過優(yōu)化瘤胃內(nèi)主導(dǎo)菌群的活性，對瘤胃內(nèi)環(huán)境起到積極作用。而乳酸菌在到達(dá)十二指腸時(shí)，需要通過真胃，其分泌的胃酸、溶菌酶等能夠裂解和殺滅細(xì)菌，致使到達(dá)腸道的活菌比例不足。大量體外試驗(yàn)證明，益生菌在發(fā)揮益生作用時(shí)，需要突破胃酸和膽堿的屏障才能有足夠數(shù)量的活菌到達(dá)腸道。由此可見，篩選開發(fā)出具有較高耐受性，且與動物品種及生長階段高度匹配的優(yōu)良菌株及其制劑，才能發(fā)揮益生菌應(yīng)有的功效。 

3.2 投喂外源乳酸菌對瘤胃和腸道VFA濃度的影響

本試驗(yàn)中，添加植物乳桿菌和乳酸菌復(fù)合系均顯著降低了瘤胃中VFA濃度，可能是瘤胃中產(chǎn)生的VFA被添加的乳酸菌利用而產(chǎn)生乳酸，而乳酸則進(jìn)一步被其他細(xì)菌利用，其具體原因有待進(jìn)一步研究。

在十二指腸中，僅乳酸菌復(fù)合系組提高了乙酸和TVFA濃度，這與Giang等報(bào)道一致，在生長豬飼糧中添加益生菌可以增加腸道乳酸、乙酸含量，對丙酸和丁酸沒有影響。其原因可能與添加的乳酸菌種類有關(guān)，一般同型乳酸菌發(fā)酵后只產(chǎn)生乳酸，異型乳酸菌發(fā)酵后除產(chǎn)生乳酸外，還能產(chǎn)生微量乙酸、乙醇及其他短鏈脂肪酸。本試驗(yàn)中，植物乳桿菌屬于同型乳酸菌，發(fā)酵后不會提升乙酸等其他有機(jī)酸濃度；而乳酸菌復(fù)合系成分較多，發(fā)酵產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物較多。在直腸中，添加2種外源乳酸菌對VFA濃度無顯著影響，這與于卓騰等研究結(jié)果一致，將雞腸道分離出的乳酸菌研制成復(fù)合乳酸菌，從飲水中飼喂給肉仔雞，肉仔雞盲腸中VFA濃度升高，但在飼養(yǎng)后期各組VFA濃度無顯著差異。這可能緣于動物不同生長階段對乳酸菌的利用有差異。

由上說明，投喂外源植物乳桿菌和乳酸菌復(fù)合系對瘤胃、十二指腸和直腸VFA濃度的影響依次減弱。其原因可能是細(xì)菌在不同部位發(fā)揮的作用不同，瘤胃中的優(yōu)勢菌群為一些纖維素降解菌，在腸道中則轉(zhuǎn)化為可利用糖類的微生物。

3.3 投喂外源乳酸菌的不同效果研究

在瘤胃中，乳酸菌復(fù)合系組的乙酸、丙酸和TVFA濃度顯著高于植物乳桿菌組；在十二指腸中，乳酸菌復(fù)合系組的活菌比例顯著高于植物乳桿菌組，且添加乳酸菌復(fù)合系可以顯著提高十二指腸中乙酸和TVFA濃度，說明投喂外源乳酸菌復(fù)合系優(yōu)于單菌植物乳桿菌。這與董曉麗的研究結(jié)果一致，即飼喂植物乳桿菌對哺乳期犢牛瘤胃中乙酸和TVFA濃度有降低趨勢，添加植物乳桿菌與枯草芽孢桿菌的復(fù)合益生菌后TVFA濃度有升高趨勢。原因可能是本試驗(yàn)乳酸菌復(fù)合系制劑中含有芽孢桿菌，而芽孢桿菌對抗胃腸道環(huán)境的耐受性強(qiáng)于單純的乳酸菌制劑。Rolfe等認(rèn)為，復(fù)合菌效果優(yōu)于單一菌，因?yàn)榍罢吣芨玫卮龠M(jìn)乳酸菌增殖，進(jìn)而發(fā)揮益生功能，且益生菌之間存在組合效應(yīng)。 

3.4 胃腸道活菌及VFA呈一定的變化規(guī)律

反芻動物瘤胃細(xì)菌呈一定的晝夜變化規(guī)律。本試驗(yàn)中，對照組瘤胃活菌比例全天呈先升高后下降的周期性變化，于晨飼后11h（20:00）出現(xiàn)峰值，這種波動反映了營養(yǎng)供給以及生理環(huán)境的變化。動物剛采食后，營養(yǎng)物質(zhì)的大量供給引起細(xì)菌生長速度加快，到20:00時(shí)達(dá)到最高值，之后隨營養(yǎng)物質(zhì)的消耗和瘤胃細(xì)菌的不斷發(fā)酵，瘤胃內(nèi)pH、滲透壓、溫度等指標(biāo)改變，最終引起細(xì)菌濃度下降。瘤胃中VFA濃度也呈一定的周期性變化。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，瘤胃中各組VFA和TVFA濃度的變化規(guī)律一致，均在飼喂后2~5h逐漸升高，之后逐漸下降，在采食后11h（20:00）達(dá)最低值。這是因?yàn)閯游锊墒澈螅暳媳幌鄳?yīng)微生物降解發(fā)酵，產(chǎn)生大量VFA；之后VFA被分解供能，其濃度逐漸降低，瘤胃中VFA保持著邊產(chǎn)生、邊吸收、邊流通的動態(tài)平衡。在十二指腸中，對照組和乳酸菌復(fù)合系組全天活菌比例無明顯周期性變化，但均在20:00出現(xiàn)峰值；對照組TVFA濃度變化與瘤胃TVFA濃度變化規(guī)律一致，同樣在20:00到達(dá)最低值。

4結(jié)論