導讀

飼用抗生素對促進動物生長與推動養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有很大的作用，但抗生素的長期使用會導致細菌的變異、耐藥菌株的產(chǎn)生、畜禽產(chǎn)品及環(huán)境中的藥物殘留等問題，直接或間接危害人類的健康。為此，人們開始尋找健康、環(huán)保、高效的動物飼料代替抗生素飼料。益生菌發(fā)酵飼料能改善飼料利用率、降低飼料抗營養(yǎng)因子等優(yōu)點日益被人們接受，已成為替代抗生素的有效途徑之一。目前，益生菌發(fā)酵飼料的研究集中在單一飼料和配合飼料上，對發(fā)酵混合飼料的研究較少。本試驗在前期的玉米－ 豆粕混合飼料發(fā)酵工藝優(yōu)化的基礎上，探討無抗生素發(fā)酵飼料對斷奶仔豬生長性能和糞便微生物的影響，為發(fā)酵混合飼料在動物日糧中的應用提供科學依據(jù)。

1材料與方法

1． 1 無抗生素發(fā)酵飼料

無抗生素發(fā)酵飼料: 先將玉米與豆粕按各50%的比例進行稱量、粉碎和混合，作為發(fā)酵混合物原料;然后進行發(fā)酵，采用的菌種由鼠李糖乳桿菌、植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、酵母菌組成，料水比為1 ∶ 0.45; 35 ℃ 厭氧發(fā)酵60 h。發(fā)酵前后玉米－ 豆粕營養(yǎng)成分變化見表1。

1.2 主要試劑

麥康凱固體培養(yǎng)基、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基、LBS固體培養(yǎng)基、BS 培養(yǎng)基、NaCl; Tween－80; 微囊金霉素、微囊喹乙醇; 瓊脂粉、冰乙酸; 純化水。

1.3 主要儀器

1mL 移液器、100 mL 移液器、厭氧培養(yǎng)箱( 型號為1209) ; 恒溫生化培養(yǎng)箱( 型號為DHP－082) ; 超凈工作臺( 型號為JJ－CJ－2F) 。

1.4 試驗動物及分組

選擇胎次相同、體重相近的28 日齡長白二元仔豬120頭，隨機分為試驗組和對照組，每組6 個重復，每個重復10 頭豬，進行為期47 d 的飼養(yǎng)試驗。

1.5 試驗設計

采用對照試驗設計，對照組在基礎日糧中添加50 mg /kg 金霉素和100 mg /kg 喹乙醇; 試驗組采用10%的無抗生素發(fā)酵飼料替代基礎日糧中相應的玉米－ 豆粕日糧，不添加抗生素?；A日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

1.6 飼養(yǎng)管理

試驗豬飼養(yǎng)在同一圈舍不同欄內(nèi)，各處理組的飼養(yǎng)管理和環(huán)境條件完全一致，均自由采食和飲水，按照常規(guī)管理方法做好驅(qū)蟲、免疫、防疫工作，每日及時清糞掃欄。認真觀察試驗豬采食、糞便和精神狀況。

1.7 測定項目及方法

1.7.1 生長性能的測定

分別于豬28 日齡和75 日齡時以重復為單位稱量試驗豬的空腹體重，同時記錄投放飼料量和剩余飼料量，計算平均日增重( ADG) 、平均日采食量( ADFI) 和料重比( F /G) 。

1.7.2 糞便微生物的測定

1) 取樣。75 日齡時在試驗組和對照組豬圈中隨機采集新鮮糞便1 g，在超凈工作臺中取采集的新鮮糞便0.1 g，加入生理鹽水0. 9 mL 稀釋，震蕩搖勻，制成1 × 10-1倍稀釋液，然后逐級稀釋至1 × 10-7倍。

2) 接種。選擇1 × 10-3～ 1 × 10-5三級稀釋液均勻涂布于麥康凱固體培養(yǎng)基( 腸桿菌選擇培養(yǎng)基)上，封口，放入37 ℃生化培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)( 16 ± 2) h。選擇1 × 10-3～ 1 × 10-5三級稀釋液均勻涂布于亞硫酸鉍固體培養(yǎng)基( 沙門氏菌選擇培養(yǎng)基) 上，封口，放入37 ℃生化培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)( 40 ± 2) h。選擇1 × 10-5～ 1 × 10-7三級稀釋液均勻涂布于LBS 固體培養(yǎng)基( 乳酸菌選擇培養(yǎng)基) 上，封口，放入37 ℃ 厭氧培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)( 36 ± 2) h。選擇1 × 10-5～ 1 × 10-7三級稀釋液均勻涂布于BS 固體培養(yǎng)基( 雙歧桿菌選擇培養(yǎng)基) 上，封口，放入37 ℃厭氧培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)( 48 ± 2) h。各種培養(yǎng)基每個稀釋度做2個平行。

3) 計數(shù)。在麥康凱培養(yǎng)基上選擇紅色或粉紅色、表面光滑、凸起、不透明、質(zhì)地軟、邊緣整齊的菌落進行計數(shù); 在亞硫酸鉍固體培養(yǎng)基上選擇黑色或灰綠色、有金屬光澤的菌落進行計數(shù); 在固體培養(yǎng)基上選擇乳白色或白色、表面光滑、凸起、不透明、質(zhì)地軟、邊緣整齊的菌落進行計數(shù); 在BS 固體培養(yǎng)基上選擇灰白色或乳白色、不透明、凸起、邊緣整齊的菌落進行計數(shù)，用菌落計算公式計算菌落數(shù)。計算公式: N =ΣC÷ ［( n1+ 0.1n2) d］。式中: N為所需菌落數(shù); ΣC 為含適宜范圍菌落數(shù)的平板菌落數(shù)之和; n1為第一個適宜稀釋度平板上的菌落數(shù); n2為第二個適宜稀釋度平板上的菌落數(shù); d為第一適宜稀釋度。

1.8 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析

采用SPSS 統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，經(jīng)單因子方差比較，結果以“平均值± 標準差”表示。

2結果與分析

2.1 無抗生素發(fā)酵飼料對斷奶仔豬生長性能的影響

由表3 可以看出，試驗組和對照組平均日增重、平均日采食量和料重比均差異顯著( P＜ 005) 。說明在斷奶仔豬日糧中添加10% 無抗生素發(fā)酵飼料能夠顯著提高斷奶仔豬平均日采食量、平均日增重，降低料重比( P＜ 0.05) 。

2.2 無抗生素發(fā)酵飼料對斷奶仔豬糞便微生物的影響

由表4 可以看出，試驗組和對照組大腸桿菌、沙門氏菌、乳酸菌、雙歧桿菌的數(shù)量均差異顯著( P＜0.05) 。說明在斷奶仔豬日糧中添加10%無抗生素發(fā)酵飼料可以降低斷奶仔豬糞便中大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量，同時提高乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量。

3討論

近年來，使用微生物發(fā)酵飼料飼喂生豬的試驗已有報道，研究結果表明，發(fā)酵混合飼料可以提高生豬生長性能，而豬的平均日增重是衡量生豬生長性能的重要指標。發(fā)酵過程可以將飼料中的粗蛋白分解成易于吸收的小肽和氨基酸，增加血液中的總蛋白，幫助生豬胃腸道建立利于生長的新的菌群平衡，促進小腸絨毛膜的生長，保護腸黏膜的完整性，提高飼料利用率。發(fā)酵混合飼料含有大量益生菌，被采食后可以在豬體內(nèi)產(chǎn)生大量的消化酶和有機酸，有利于豬的消化。陳玉龍等研究發(fā)現(xiàn)，將日糧中的普通豆粕用發(fā)酵豆粕替代，可以顯著降低料重比。胡新旭等、周映華等研究結果表明，在生長育肥豬飼料中添加20%無抗發(fā)酵飼料可以顯著提高豬的生產(chǎn)性能。林靖等研究發(fā)現(xiàn)，用5% 發(fā)酵豆粕替代日糧中的普通豆粕，可以顯著提高生長豬的生長性能。鄒文等研究結果表明，在生長育肥豬日糧中添加20%無抗發(fā)酵飼料試驗組生產(chǎn)性能、血液生化指標、肉品質(zhì)各項指標均優(yōu)于對照組。

在生豬養(yǎng)殖中，糞便是一項重要的污染源以及人畜共患病的主要載體。糞便中的致病菌會污染周圍環(huán)境中的水體和土壤，感染人畜。林標聲等研究結果表明，飼喂微生物發(fā)酵飼料可以顯著提高糞便中有益菌數(shù)量。辛小召等研究結果表明，飼喂?jié)駪B(tài)發(fā)酵豆粕和發(fā)酵濃縮料可以提高泌乳母豬糞便有益活菌含量。本試驗結果表明，10%無抗生素發(fā)酵飼料對提高斷奶仔豬平均日增重、平均日采食量和降低料重比的影響明顯優(yōu)于添加50 mg /kg 金霉素和100 mg /kg 喹乙醇的未發(fā)酵飼料，同時降低糞便中大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量，提高乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量。本試驗研究結果與前人的研究一致，說明無抗生素發(fā)酵飼料可以維持糞便中微生物菌群的平衡。

4結論

在不添加抗生素的前提下，采用10% 無抗生素發(fā)酵飼料替代基礎日糧中相應的玉米－ 豆粕型日糧，可以替代抗生素的使用，提高斷奶仔豬的平均日增重，改善料重比，調(diào)節(jié)腸道微生物菌群平衡，為無抗豬肉的生產(chǎn)提供可行的途徑。

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