小麥-豆粕型飼糧添加復(fù)合酶制劑對肉雞腸道微生物菌群和酸度的影響
飼用酶制劑不僅會促進(jìn)機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，而且會影響腸道微生物的發(fā)育（任文等，2017；NIBA等，2009）。周小娟等（2013）研究發(fā)現(xiàn)AA肉雞飼糧中添加復(fù)合酶可明顯降低盲腸大腸桿菌數(shù)量，提高乳酸桿菌數(shù)量。Choct等（2004）研究報道，小麥日糧添加木聚糖酶使雞腸道食糜黏度下降，微生物區(qū)系改變。由腸道菌群構(gòu)建的生物屏障可對外界及機(jī)體內(nèi)的病原微生物產(chǎn)生定植抗力，防止其侵入機(jī)體，保持健康（甄建華等，2017）。多年來飼用酶制劑研究主要集中在對動物生長性能以及營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響，而對腸道微生物區(qū)系的影響及其相關(guān)作用機(jī)制的研究相對較少（任文等，2017）。本試驗研究了肉雞小麥-豆粕型飼糧添加不同水平復(fù)合酶制劑對肉雞胃腸道微生物菌群和食糜酸度的影響，從而為其在肉雞小麥型飼糧中的合理應(yīng)用提供參考依據(jù)。
1材料與方法
1.1 試驗材料與動物
4種單酶制劑按復(fù)合酶酶譜劑量均勻混合，復(fù)合酶酶譜：木聚糖酶（850U/g）、纖維素酶（750U/g）、β-葡聚糖酶（50U/g）、植酸酶（2000U/kg）（薛梅等，2015）。
1.2 試驗設(shè)計
將1日齡健康A(chǔ)A肉雞720只（體重40g左右）隨機(jī)分為6組（120只/組），每組設(shè)6個重復(fù)（20只/重復(fù)），1組（對照組）飼喂基礎(chǔ)飼糧，2~6組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加1000、1500、2000、2500、3000mg/kg復(fù)合酶制劑。試驗分1~21d和22~42d兩個階段。基礎(chǔ)飼糧參照AA肉雞營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制（表1）。
1.3 試驗雞的飼養(yǎng)管理
試驗雞采用三層半階梯式籠養(yǎng)，自由采食、飲水，按照白羽肉雞常規(guī)飼養(yǎng)管理規(guī)程飼養(yǎng)于同棟雞舍。
1.4 腸道不同部位內(nèi)容物微生物檢測
樣品采集與處理：在試驗第21天和42天，從每個重復(fù)中選擇接近平均體重的肉雞1只，頸部放血處死，迅速打開腹腔，分別結(jié)扎十二指腸、空腸、回腸和盲腸兩端，取下十二指腸、空腸、回腸和盲腸后，立即放入-20℃冰箱中保存。取低溫保存的十二指腸、空腸、回腸和盲腸自然解凍，在超凈工作臺中取內(nèi)容物，充分混勻后取0.5g，加入到盛有4.5mL滅菌生理鹽水的離心管中，用微型振蕩器振蕩10min，此液為10-1倍稀釋液，離心后吸取上清液0.5mL，加入盛有4.5mL滅菌生理鹽水的另一只離心管中進(jìn)行10-2倍稀釋，依次稀釋到10-7倍。
細(xì)菌培養(yǎng)：取稀釋液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，乳酸桿菌采用乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基（LBS）37℃厭氧培養(yǎng)48h、雙歧桿菌采用雙歧桿菌培養(yǎng)基（BS）37℃厭氧培養(yǎng)48h、大腸桿菌采用麥康凱培養(yǎng)基37℃有氧培養(yǎng)24h、總需氧菌采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基37℃有氧培養(yǎng)24h、總厭氧菌采用Schaedler厭氧菌瓊脂培養(yǎng)基37℃厭氧培養(yǎng)48h。每個稀釋度做3個重復(fù)。
菌落計數(shù)：選擇最適宜的稀釋梯度（以0~300個菌落為宜），對細(xì)菌進(jìn)行平板菌落計數(shù)，每個樣品取3個重復(fù)平均值，并計算每克腸道內(nèi)容物所含的細(xì)菌數(shù)。結(jié)果以每克內(nèi)容物中菌落數(shù)的常用對數(shù)表示（lg cfu/g）。
1.5 消化道不同部位食糜酸度檢測
在試驗第21天和第42天，從每個重復(fù)中選擇接近平均體重的肉雞1只，頸部放血處死，迅速打開腹腔，取出嗉囊、腺胃、肌胃、小腸（十二指腸、空腸、回腸）和盲腸食糜，立即用testo 205型pH計測其pH。
1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理
數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行初步整理，采用SPSS 17.0進(jìn)行ANOVO方差分析、Duncan法進(jìn)行組間多重比較。結(jié)果表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”。
2結(jié)果與分析
2.1 不同水平復(fù)合酶制劑對肉雞腸道不同部位大腸桿菌數(shù)量的影響
21d和42d肉雞腸道各部位大腸桿菌數(shù)量隨復(fù)合酶制劑添加水平的增加呈不同程度下降趨勢（表2）。十二指腸和空腸內(nèi)容物大腸桿菌數(shù)量各組間均差異不顯著（P＞0.05）；21d肉雞回腸內(nèi)容物大腸桿菌數(shù)量，4~6組分別較1組降低0.94%、1.10%、1.41%（P＜0.05）。42d肉雞回腸內(nèi)容物大腸桿菌數(shù)量，3~6組分別較1組降低1.03%（P＜0.05）、1.33%（P＜0.05）、1.62%（P＜0.01）、1.77%（P＜0.01）；4~6組盲腸內(nèi)容物大腸桿菌數(shù)量分別較1組降低0.83%（P＜0.05）、1.11%（P＜0.01）、1.11%（P＜0.01）。各組雞腸道大腸桿菌數(shù)量存在部位的明顯差異，腸道前段至后段數(shù)量逐漸增多。
2.2 不同水平復(fù)合酶制劑對肉雞腸道不同部位乳酸桿菌數(shù)量的影響
21d和42d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物乳酸桿菌數(shù)量，2~6組均不同程度高于1組（表3）。21d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物乳酸桿菌數(shù)量，4~6組空腸分別較1組升高2.18%、2.47%、3.20%（P＜0.05），2~6組盲腸分別較1組升高2.06%、3.22%、3.60%、3.47%、3.60%（P＜0.05）。42d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物乳酸桿菌數(shù)量，4~6組十二指腸分別較1組升高0.94%（P＜0.05）、1.34%（P＜0.01）、1.34%（P＜0.01）；4~6組空腸分別較1組升高1.59%（P＜0.05）、1.74%（P＜0.01）、2.03%（P＜0.01）；4~6組盲腸分別較1組升高0.97%（P＜0.01）、1.09%（P＜0.01）、1.09%（P＜0.01）。
2.3 不同水平復(fù)合酶制劑對肉雞腸道不同部位雙歧桿菌數(shù)量的影響
21d和42d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物雙歧桿菌數(shù)量，2~6組均不同程度高于1組（表4）。21d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物雙歧桿菌數(shù)量，4~6組十二指腸分別較1組升高3.28%、4.37%、4.74%（P＜0.05），6組空腸較1組升高2.59%（P＜0.05）。42d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物雙歧桿菌數(shù)量，3~6組十二指腸分別較1組升高2.37%、2.92%、3.28%、3.65%（P＜0.05）；3~6組回腸分別較1組升高1.04%、1.34%、1.49%、1.64%（P＜0.05）；3~6組盲腸分別較1組升高0.63%、0.88%、1.13%、1.13%（P＜0.05）；6組空腸較1組升高1.78%（P＜0.05）。
2.4 復(fù)合酶制劑對肉雞腸道總需氧菌數(shù)量的影響
21d和42d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物總需氧菌數(shù)量，2~6組均不同程度低于1組（表5）。21d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物總需氧菌數(shù)量，5組、6組十二指腸分別較1組降低1.91%、2.07%（P＜0.05）；5組、6組盲腸分別較1組降低2.04%、2.99%（P＜0.05）。42d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物總需氧菌數(shù)量，4~6組十二指腸分別較1組降低1.47%、1.28%、1.65%（P＜0.05）；5~6組空腸分別較1組降低1.76%、1.76%（P＜0.05）；6組回腸較1組降低1.44%（P＜0.05）；3~6組盲腸分別較1組降低1.07%、2.28%、2.55%、2.82%（P＜0.05）。
2.5 復(fù)合酶制劑對肉雞腸道總厭氧菌數(shù)量的影響
21d和42d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物總厭氧菌數(shù)量，2~6組均不同程度高于1組（表6）。21d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物總厭氧菌數(shù)量，4~6組十二指腸分別較1組升高0.96%、1.24%、1.37%（P＜0.05）；3~6組回腸分別較1組升高1.22%、2.03%、2.30%、2.71%（P＜0.05）；3~6組盲腸分別較1組升高0.99%、1.37%、1.86%、2.11%（P＜0.05）。42d肉雞腸道不同部位內(nèi)容物總厭氧菌數(shù)量，4~6組十二指腸分別較1組升高0.79%、1.19%、1.32%（P＜0.05）；4~6組回腸分別較1組升高0.97%、1.39%、1.53%（P＜0.05）；4~6組盲腸分別較1組升高0.83%、1.07%、1.30%（P＜0.05）；5~6組空腸分別較1組升高1.41%、1.55%（P＜0.05）。
2.6 不同水平復(fù)合酶制劑對肉雞消化道食糜酸度的影響
21、42d肉雞的嗉囊、腺胃、肌胃、十二指腸、空腸、回腸和盲腸食糜pH（表7）各試驗組（2~6組）均低于對照組（1組），但差異均不顯著（P＞0.05）。
討 論
3.1 小麥-豆粕型飼糧中添加復(fù)合酶制劑對肉雞腸道微生物的影響
有益菌乳酸桿菌和雙歧桿菌及致病菌大腸桿菌是動物腸道的正常菌群。研究發(fā)現(xiàn)木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纖維素酶以及β-甘露聚糖酶等NSP酶對胃腸道中有益菌有益生作用，而對有害菌具有抑制作用（任文等，2017；丁雪梅等，2009）。周利芬等（2004）研究報道，肉雞飼糧中添加酶制劑能促進(jìn)腸道乳酸菌的生長，抑制大腸桿菌的生長；宋智娟等（2006）研究報道，β-葡聚糖酶的添加，促進(jìn)了乳酸桿菌、雙歧桿菌的生長，抑制了大腸桿菌的生長。本試驗結(jié)果顯示，小麥-豆粕型飼糧中添加復(fù)合酶制劑，肉雞腸道各部位的大腸桿菌、總需氧菌數(shù)量有不同程度降低，而乳酸桿菌、雙歧桿菌、總厭氧菌數(shù)量呈明顯增加趨勢，本試驗所用復(fù)合酶制劑有優(yōu)化肉雞腸道有益菌群的作用，與上述研究結(jié)果一致。但不同復(fù)合酶對腸道微生物的影響報道不盡一致，有部分研究發(fā)現(xiàn)飼用酶制劑對腸道微生物菌群影響不明顯（任文等，2017）。
3.2 小麥-豆粕型飼糧中添加復(fù)合酶制劑對肉雞消化道食糜酸度的影響
消化道微生物、腺胃分泌的鹽酸、胰液、膽汁及腸液等是消化道食糜酸度值的決定因素，pH降低可抑制大腸桿菌的生長，促進(jìn)乳酸桿菌、雙歧桿菌的增殖，而乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌又可將腸道中的可發(fā)酵性糖轉(zhuǎn)變成乳酸和醋酸，從而降低腸道環(huán)境的pH（Zacherl等，2011；Dikeman等，2006）。動物胃腸道酸性環(huán)境有利于胃蛋白酶原的激活，pH越低，胃蛋白酶原激活率越高（冷向軍等，2001）。呂秋鳳等（2013）研究報道，小麥飼糧中添加木聚糖酶能夠顯著降低肉雞空腸食糜pH。本試驗顯示添加不同水平復(fù)合酶制劑肉雞消化道各部位食糜酸度均低于對照組，但差異均不顯著。Mathlouthi（2003）報道，小腸酸度值的下降是由木聚糖酶和β-葡聚糖酶降解NSP產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸造成的。Hume（1992）等研究表明，盲腸酸度值的下降是由于酶制劑提高了腸道內(nèi)乳酸菌和揮發(fā)性脂肪酸的濃度。
4結(jié) 論
本試驗結(jié)果顯示，肉雞小麥-豆粕型飼糧中添加不同水平復(fù)合酶制劑，可不同程度增加腸道中乳酸桿菌、雙歧桿菌、總厭氧菌的數(shù)量，降低大腸桿菌和總需氧菌的數(shù)量；不同水平復(fù)合酶制劑均有降低肉雞消化道各部位食糜酸度值趨勢，添加量以2000~3000mg/kg作用效果最佳。
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