4 樣品采集及測(cè)定方法

4.1 產(chǎn)奶量測(cè)定

試驗(yàn)期每天測(cè)定２次，分別于4：30和17：30收集牛乳，采用美國(guó)BouMatic自動(dòng)擠奶系統(tǒng)記錄產(chǎn)奶量。

4.2 牛奶成分分析

于試驗(yàn)期第１０、２０、３０和４０天早晚按１∶１比例采集５０ｍＬ奶樣盛入加有重鉻酸鉀的離心管中混合均勻，送往洛陽市ＤＨＩ檢測(cè)中心，采用美國(guó)本特利ＬＹ－ＹＱ０００２測(cè)定儀進(jìn)行體細(xì)胞測(cè)定，ＦＣＭ－１５０分析儀測(cè)定乳脂肪、乳蛋白、乳糖、非固體物質(zhì)、干物質(zhì)、尿素氮等指標(biāo)。

4.3 乳清指標(biāo)的測(cè)定

乳清指標(biāo)均用上海翱藝UV－1200型紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定。于試驗(yàn)期第10、20、30和40天早晚按１∶１比例每頭牛各采集50ｍＬ乳樣，經(jīng)４℃低溫離心（1000r／min，30min）取中間層，將所得乳清分裝在１０個(gè)離心管，－２０℃冷凍保存待測(cè)。乳清測(cè)定指標(biāo)包括：超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、總抗氧化能力（ＴＡＣ）、丙二醛（ＭＤＡ）、蛋白定量、堿性磷酸酶（ＡＫＰ）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ＡＬＴ）及谷草轉(zhuǎn)氨酶（ＡＳＴ）。

5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Excel進(jìn)行初步整理，用 SPSS 20.0 進(jìn)行單因素方差分析（one－wayANOV），采用 Duncan 法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

結(jié)果與分析

1 雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料營(yíng)養(yǎng)成分

雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料成熟后，莖葉清晰可見，氣味芳香，質(zhì)地柔軟。由表2可見，相對(duì)于苜蓿草粉而言，雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料的CP、TND和NEL相當(dāng)，NDF、EE、Ash與Ca的含量較高，而ADF、ADL、P含量略低。從主要營(yíng)養(yǎng)成分指標(biāo)看，雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料替代苜蓿飼喂奶牛是可行的。

2 奶牛產(chǎn)奶量和乳成分

奶牛產(chǎn)奶量和乳成分見表3。與對(duì)照組相比：試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組產(chǎn)奶量、乳脂率、乳蛋白率和干物質(zhì)差異不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)Ⅰ組乳糖率顯著提高（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05），但Ⅰ組較Ⅱ組提高了1.39％（P＜0.05）；試驗(yàn)Ⅱ組非脂固體顯著降低（P＜0.05），Ⅰ、Ⅲ組無差異顯著（P＞0.05）；Ⅰ組尿素氮顯著降低（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ組有降低趨勢(shì)但差異不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)Ⅲ組體細(xì)胞降低了36.11％（P＜0.05），Ⅰ、Ⅱ組差異不顯著（P＞0.05）。

3 奶牛乳清指標(biāo)

3.1 奶牛乳清抗氧化指標(biāo)

由表4可見，與對(duì)照組相比，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組ＳＯＤ均差異不顯著（P＞0.05）；Ⅰ、Ⅱ組ＭＤＡ含量差異均不顯著（P＞0.05），試驗(yàn)Ⅲ組的含量顯著降低（P＜0.05）；Ⅰ、Ⅱ組ＴＡＣ均無顯著差異（P＞0.05），試驗(yàn)Ⅲ組顯著提高了47.83％（P＜0.05）。

3.2 奶牛乳清生化指標(biāo)

由表5見，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組蛋白定量及ＡＫＰ均差異不顯著（P＞0.05）；Ⅱ、Ⅲ組ＡＬＴ顯著降低（P＜0.05），Ⅰ組差異不顯著（P＞0.05）；Ⅰ組ＡＳＴ顯著降低71％（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ組差異均不顯著（P＞0.05）。

討論

1 雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料對(duì)產(chǎn)奶量及乳成分的影響

產(chǎn)奶量是衡量奶牛生產(chǎn)性能的直觀標(biāo)準(zhǔn)，飼喂雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料對(duì)奶牛產(chǎn)奶量及乳成分含量均有一定程度的積極影響，但奶量、乳脂率、乳蛋白和干物質(zhì)各組間差異均不顯著，這與Si等的研究結(jié)果基本一致。非脂乳固體含量是衡量牛乳營(yíng)養(yǎng)質(zhì)量的一項(xiàng)指標(biāo)，會(huì)影響酸奶的粘稠度及保鮮度，本試驗(yàn)中8％添加量的試驗(yàn)結(jié)果與張慧敏等的非脂固體與乳糖、乳蛋白呈顯著正相關(guān)研究結(jié)果略有差異，但符合不得低于8.3％的標(biāo)準(zhǔn)。

乳糖是乳中主要的碳水化合物，可以促進(jìn)鈣和氨基酸的吸收、調(diào)節(jié)腸道菌群。在斷奶前和剛斷奶的仔豬飼料中加入高濃度的乳糖可避免引發(fā)道的高滲透壓，降低腹瀉率。利用牛奶尿素氮含量評(píng)價(jià)奶牛日糧粗蛋白水平、能氮平衡、氮利用率、繁殖率以及診斷代謝疾病已成為奶牛科學(xué)研究的熱點(diǎn)。有研究表明尿素氮值隨產(chǎn)奶量的增加而升高，Broderick等研究發(fā)現(xiàn)尿素氮值和產(chǎn)奶量呈負(fù)相關(guān)，并與乳蛋白、乳脂含量均呈負(fù)相關(guān)。此外，牛奶中的體細(xì)胞是反映乳腺健康和牛奶品質(zhì)的關(guān)鍵因素，因?yàn)檫@些細(xì)胞是在乳腺炎免疫反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生的，每毫升含有40多萬體細(xì)胞的牛奶被認(rèn)為不適合人類食用，到達(dá)50萬則被認(rèn)為是隱性乳腺炎。相關(guān)研究表明，如果將體細(xì)胞水平降低到50000個(gè)／mL，不僅能夠提高牛奶產(chǎn)量，農(nóng)場(chǎng)溫室氣體總排放強(qiáng)度也有可能降低3.7％。在本試驗(yàn)中，添加12％的雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料對(duì)降低牛奶體細(xì)胞效果明顯，這與Si等研究結(jié)果相一致。此外，有報(bào)道體細(xì)胞的增加會(huì)導(dǎo)致脂肪和蛋白質(zhì)含量增加，而牛奶產(chǎn)量、乳糖和尿素氮含量將明顯下降，但本試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)此類情況，可能是由于雜交構(gòu)樹中的活性成分具有抗炎作用，從而避免了因炎癥所導(dǎo)致的相關(guān)指標(biāo)合成減少。Reis等在乳體細(xì)胞的差異水平研究中發(fā)現(xiàn)了乳脂、蛋白質(zhì)和乳糖的相應(yīng)變化，并且乳體細(xì)胞與乳尿素氮值之間呈正相關(guān)，Mazal等在研究中也得出了同樣的結(jié)論，即當(dāng)奶牛的乳房沒有被感染時(shí)，體細(xì)胞和牛奶中的蛋白質(zhì)含量之間可能沒有聯(lián)系。

2 雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料對(duì)乳清抗氧化指標(biāo)的影響

牛乳中含有60種以上的酶，通過分析泌乳過程中進(jìn)入乳中的酶，可以獲知乳腺細(xì)胞的代謝情況，并輔助進(jìn)行相關(guān)疾病的診斷，同時(shí)多種抗氧化物質(zhì)的攝取對(duì)于人類預(yù)防心血管、癌癥、神經(jīng)等疾病具有重要意義。ＳＯＤ和ＴＡＣ是衡量生物機(jī)體內(nèi)抗氧化能力的重要指標(biāo)，可降低自由基對(duì)機(jī)體的毒害程度；血漿酶活性在產(chǎn)奶期和干奶期有顯著變化，需要在產(chǎn)奶期對(duì)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測(cè)；脂質(zhì)過氧化被認(rèn)為是包括炎癥在內(nèi)的許多疾病的關(guān)鍵因素，同時(shí)導(dǎo)致牛奶營(yíng)養(yǎng)價(jià)值降低；ＭＤＡ為脂質(zhì)過氧化標(biāo)志物，檢測(cè)ＭＤＡ的濃度不僅可以判斷脂質(zhì)過氧化程度，還可作為乳腺炎的診斷指標(biāo)?？寡趸到y(tǒng)能夠有效地應(yīng)對(duì)過氧化脂質(zhì)的產(chǎn)生，可在ＭＤＡ中觀察到巨大的個(gè)體間變異。

相關(guān)報(bào)道表明牛奶體細(xì)胞計(jì)數(shù)與ＭＤＡ正相關(guān)，與ＴＡＣ負(fù)相關(guān)，本試驗(yàn)與此研究結(jié)果一致。黃酮類化合物是影響雜交構(gòu)樹青貯飼料抗氧化活性的主要成分，隨著該成份的增加，雜交構(gòu)樹青貯飼料的抗氧化能力得到提高。相關(guān)研究表明灌木和樹木的平均ＴＡＣ水平高于草及干草，高ＴＡＣ植物的攝入可能有利于牛的ＴＡＣ狀態(tài)。本試驗(yàn)中雜交構(gòu)樹青貯飼料未對(duì)奶牛乳清ＳＯＤ濃度產(chǎn)生影響，試驗(yàn)結(jié)果均在正常范圍之內(nèi)，這可能是由于試驗(yàn)周期或雜交構(gòu)樹青貯飼料的劑量不在適當(dāng)范圍內(nèi)所造成的。

3 雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料對(duì)乳清生化指標(biāo)的影響

ＡＬＴ、ＡＳＴ和ＡＫＰ是重要的分解酶，在動(dòng)物的肝功能方面有重要作用。牛乳中的ＡＫＰ也來自中性粒細(xì)胞，在未感染乳腺炎外周血中，酶活性相對(duì)較低。當(dāng)微生物侵染時(shí)，機(jī)體啟動(dòng)免疫防御機(jī)制的表現(xiàn)之一是帶有ＡＫＰ活性的中性粒細(xì)胞比率增加，且在感染后第3天ＡＫＰ的活性顯著提高，即ＡＫＰ活性與炎癥嚴(yán)重程度密切相關(guān)。也有研究表明體細(xì)胞和ＡＫＰ呈極顯著正相關(guān)，但本試驗(yàn)ＡＫＰ各組間差異不顯著，這可能是由于試驗(yàn)時(shí)間不足或添加劑量不在適當(dāng)范圍內(nèi)所造成的。血清轉(zhuǎn)氨酶水平升高是肝臟疾病的一項(xiàng)指標(biāo)，Liu等研究發(fā)現(xiàn)牛奶和血漿中血清轉(zhuǎn)氨酶活性之間有顯著正相關(guān)性，檢測(cè)牛奶中ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＫＰ活性可能是監(jiān)測(cè)奶牛肝功能的一種替代方法。Misle 等研究結(jié)果表明，機(jī)體內(nèi)的ＡＬＴ和ＡＳＴ與牛齡正相關(guān)，而本試驗(yàn)所選牛胎次為２～４胎，存在一定的年齡差距，因此對(duì)本項(xiàng)指標(biāo)或有一定影響。乳清可用作功能性食品，乳清蛋白對(duì)與氧化應(yīng)激相關(guān)的疾病有治療作用，同時(shí)有助于降低血液中轉(zhuǎn)氨酶、尤其是ＡＬＴ的水平。乳清在體外試驗(yàn)中具有影響轉(zhuǎn)氨酶的還原、抑制酶活性等作用。導(dǎo)致奶牛酶活性變化的原因是多方面的，本試驗(yàn)中檢測(cè)到的ＡＳＴ差異可能與試驗(yàn)個(gè)體的生理階段以及環(huán)境等因素有關(guān)，這些因素還有待進(jìn)一步研究。

結(jié)論

添加8％和12％雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料可降低牛乳體細(xì)胞含量，并提高乳清抗氧化功能，雜交構(gòu)樹發(fā)酵飼料可作為新型木本飼料開發(fā)利用。