發酵飼料替代抗生素在斷奶仔豬日糧中的應用
近年來抗生素濫用現象越來越嚴重，國家對飼料行業的抗生素使用的管理也逐年嚴格。2017年4月硫酸粘桿菌素禁止在豬飼料中使用，標志著以促生長功能添加，無抗時代正在來臨，對于可替代抗生素產品的研究迫在眉睫。發酵飼料作為抗生素的替代品在豬飼養應用研究較少，但相關研究均表明其替代抗生素是可行的，本文旨在通過發酵飼料替代抗生素在斷奶仔豬日糧中的應用以研究其替代抗生素的具體方式，從而指導生產，為抗生素替代品的研發提供一種新的嘗試。
1材料與方法
1.1 試驗材料
試驗菌種：糞腸球菌（濰坊某公司），枯草芽孢桿菌（廣州市某公司），啤酒酵母菌（東方某公司）。
1.2 試驗設計
將150頭體重約7 kg斷奶仔豬（杜×長×大三元雜交豬）按體重大小隨機分為15欄，每欄10頭。分成3個處理組，每個處理組5個重復，每欄為一個重復，分別為發酵飼料組、抗生素組及對照組，飼養45 d。對照組：基礎日糧；發酵飼料組：20%取代玉米豆粕（干物質計）；抗生素組：恩拉霉素20 mg·kg-1飼料。
1.3 試驗飼糧
對照組飼糧營養水平參考NRC（2012）仔豬營養需要配制，對照組飼糧組成及營養水平見表1。按照對照組的玉米-豆粕型日糧按比例粉碎混合均勻，取100 kg，料水比1：1，芽孢桿菌和酵母菌的接種量為3%，乳酸菌接種量為2%，同玉米-豆粕型日糧混合均勻，填入到塑料桶中，表層用塑料薄膜密封，發酵溫度為37 ℃，發酵時間為72 h，之后即可作為發酵飼料添加使用。發酵飼料組營養為對照組飼糧中的20%玉米、豆粕進行發酵后替代相應比例原料，抗生素組營養為基礎飼糧中添加（有效成分計）恩拉霉素20 mg·kg-1。
1.4 飼養管理
試驗在哈爾濱某豬場進行，試驗前豬舍清洗消毒。按照仔豬常規管理辦法進行管理，試驗豬只斷奶后飼養45 d試驗結束。每日飼喂4次，自由采食、飲水。所有試驗豬均飼養于同一棟豬舍內，各組之間相互隔開，并保證向陽面與背陽面每組欄數相等，以控制環境因素一致。
1.5 檢測指標與方法
1.5.1 平均日增重
在試驗開始前和試驗結束后早上逐欄進行空腹稱重，記錄總重和均重，計算公式見式1~3。
初始均重=初始總重/頭數（1）
結束均重=結束總重/頭數（2）
平均日增重={（結束總重一初始總重）/試驗天數}/頭數（3）
1.5.2 平均日采食量
準確記錄每欄豬每天投喂量，計算公式見式4。
日采食量=總投喂量/試驗天數/頭數（4）
1.5.3 料肉比
料肉比計算公式見式5。
料肉比=日采食量/日增重（5）
1.5.4 腹瀉率和發病率
腹瀉率和發病率計算公式見式6~7。腹泄判斷標準依據為拉稀不成形狀判斷為腹瀉。發病判斷標準的依據為發病情況嚴重，有明顯癥狀，需要打針用藥等處理。
腹瀉頻率=腹瀉頭數×腹瀉天數（頭日數） （6）
發病頻率=發病頭數×發病天數（頭日數） （7）
1.5.5 血液采集及分析
試驗結束后每欄隨機選3 頭，用真空促凝管進行前腔靜脈采血獲取血清后，立即置于冰盒中，5000r·min-1離心，取上清于新的1.5mL離心管中，冷凍保藏，用于測定血清各指標。血清生理生化指標及免疫指標委托哈爾濱醫大第一附屬醫院進行檢測。
1.5.6 糞便采集
試驗結束前，每日9: 00在豬進食后2 h采集新鮮糞便放入編號的自封袋中，并加入10%鹽酸，置于-20 ℃冷凍保藏，用以測定表觀消化率。
1.5.7 飼料樣品采集
取試驗組和對照組飼料，放置于無菌封口袋中，置于-20 ℃保存，用于測定飼料中的pH、水分、粗蛋白質、鉻含量、菌數等指標。
1.5.8 飼料中鉻含量的測定方法
飼料中鉻含量的測定采用二苯碳酰二肼比色法進行測定。
準確稱取經過烘干、研磨的蛋白質0.1~0.2 g于250 mL三角瓶中，加入10 mL濃硝酸，放置過夜；電熱板120 ℃加熱至近干，取下冷卻；分兩次加入30%的雙氧水5 mL，在電熱板上加熱至溶液無色，蒸干；取下加入水與三角瓶，用氨水（1/1）和濃硫酸（1/3）將pH調至中性；加0.5 mL硫酸（1/3）和0.5 mL磷酸（1/3）溶液，搖勻，加入一滴高錳酸鉀（2%）溶液，然后煮沸10 min，如果紫紅色退去，立即補加高錳酸鉀溶液使其保持紫紅色；取下加入20%尿素溶液1 mL，搖勻，滴加2%的亞硝酸鈉溶液，至紫色剛好褪去；待氣泡逸盡，過濾后轉移到比色管，稀釋至25 mL，加入1 mL顯色劑立即搖勻，10 min后于540 nm處比色；標準曲線的繪制，鉻儲備液（1 mg·mL-1）的配制：稱取2.8 289 g預先經150 ℃ 烘干1 h的重鉻酸鉀于250 mL燒杯中充分溶解后移入1 L容量瓶中，加水至刻度后混勻。
鉻標準液（10.0 μg·mL-1）的配制：移取10 mL鉻儲備液于1 L 容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。此溶液1 mL含10 μg鉻。
分別于一組25 mL的比色管中分別加入三氧化二鉻標準溶液0、1、2、3、4、5、6、7、8、9 mL，加硫酸0.5 mL（1/3），磷酸0.5 mL（1/3）稀釋至25 mL，加入顯色劑立即搖勻，10 min 后于540 nm處以水為參比進行比色，以吸光度為縱坐標，Cr2O3含量為橫坐標，繪制工作曲線。
1.6 統計分析
試驗數據采用SPSS 20.0軟件One Way ANOVA進行統計分析，并進行Duncan's多重比較，結果以“平均值±標準誤”表示。
2試驗結果
2.1 生長性能
發酵飼料對豬生長性能的影響見表2。
由表2可知，各試驗組豬初始體重、平均日采食量無顯著差異。抗生素組各項生長指標與對照組相比無顯著差異。發酵飼料組的結束體重和平均日增重顯著高于對照組，料肉比顯著低于對照組（P<0.05）。試驗組與對照組相比，腹瀉率明顯減少，其中發酵飼料組腹泄率降低了52.7%，抗生素組降低了36.4%，但對于豬的發病率影響作用不大。
2.2 血清生化指標
發酵飼料對豬血清生化及免疫指標的影響見表3。
血液指標可以反映出動物體的健康狀況和營養代謝狀況。由表3可知試驗組豬的IgG和IgM均高于對照組，但差異不顯著（P<0.05），抗生素組血糖含量顯著低于對照組（P<0.05），發酵飼料組血清球蛋白、尿素氮顯著高于對照組（P<0.05）。
2.3 粗蛋白質表觀消化率
發酵飼料對豬粗蛋白質表觀消化率的影響見表4。
通過飼料中粗蛋白質含量的分析，可知飼喂發酵飼料可略微提高飼料的粗蛋白質含量。由表4可見，發酵飼料組和抗生素組的粗蛋白表觀消化率均比對照組高，分別提高3.7%和2.58%，但差異不顯著（P>0.05），發酵飼料組比抗生素組提高更多。
3討論
從試驗結果可知，無論是生長性能、日采食量、腹瀉率還是表觀消化率，發酵飼料組都優于抗生素組。這可能與飼料中的益生菌數量有關。
球蛋白可以反映機體的抵抗力水平。從血清生化指標結果可知，發酵飼料組的豬血清中球蛋白和抗體（IgG和IgM）的含量均高于對照組，表明飼喂發酵飼料在一定程度上可以提高豬的免疫能力。
血清中的尿素氮濃度可以比較準確地反映動物體內氨基酸和蛋白質代謝之間的平衡狀況。研究表明，日糧中的含氮物質增加，機體的氨基酸代謝隨之加強，血清中的尿素無法排出時則血清尿素氮濃度增高。血清中尿素氮含量升高表明蛋白質分解代謝增強。試驗可知發酵飼料組血清尿素氮顯著高于對照組（P<0.05），表明發酵飼料組豬的分解代謝增強。
血糖為血液中的糖分，絕大多數情況下都是葡萄糖，血糖含量降低（在生理正常值范圍內）則表示腸道對于葡萄糖的消化吸收能力有所減弱。由試驗數據可知抗生素組豬血糖含量顯著低于對照組（P<0.05），表明飼喂抗生素會影響豬對于葡萄糖的吸收。
4結論
飼喂發酵飼料可以提高斷奶仔豬的生長性能和消化能力，降低豬的腹瀉率和料肉比，增強豬健康狀況。本試驗研究表明，發酵飼料組血清尿素氮顯著高于對照組，表明豬的分解代謝增強。發酵飼料組的血清中的IgG、IgM、球蛋白的含量高于對照組，表明發酵飼料在一定程度上可以提高豬的免疫能力。
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