1.1 試驗(yàn)材料

綠茶茶渣由松陽(yáng)縣綠谷茶鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。活菌數(shù)為1×107CFU/g的枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和黑曲霉由浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院飼料所提供。

以枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和黑曲霉為發(fā)酵菌株，按照本實(shí)驗(yàn)室的優(yōu)化工藝參數(shù)，即以70%豆粕、15%茶渣和15%麩皮為發(fā)酵底物，在溫度為30℃、含水量55%的條件下發(fā)酵72h，得到生物發(fā)酵飼料。發(fā)酵飼料的營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院畜牧所雙江實(shí)驗(yàn)基地進(jìn)行。試驗(yàn)期內(nèi)，試驗(yàn)雞只每天06:30、14:30各飼喂1次干拌料。有窗雞舍3層階梯式籠養(yǎng)，每窩位4只雞。自由采食與飲水，每日恒定光照16h，并觀察雞只健康情況，飼養(yǎng)管理和免疫均按照試驗(yàn)場(chǎng)原有程序進(jìn)行。

1.4 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

試驗(yàn)期間以重復(fù)為單位，記錄每天的喂料量、產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、破軟蛋數(shù)和死亡數(shù)，以周為單位，計(jì)算每重復(fù)產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比、破軟蛋率和死淘率。

1.4.2 蛋品質(zhì)

收集試驗(yàn)第28天和第56天的雞蛋，每重復(fù)5枚。用游標(biāo)卡尺測(cè)量雞蛋的縱徑長(zhǎng)和橫徑長(zhǎng)，并計(jì)算蛋形指數(shù)；用千分尺測(cè)量蛋殼厚度，測(cè)量雞蛋蛋殼3個(gè)不同位置，以其平均值作為該雞蛋蛋殼厚度；用羅氏比色扇測(cè)定蛋黃顏色，用SONOVA蛋品質(zhì)自動(dòng)分析儀測(cè)定雞蛋的哈氏單位。

1.4.3 血清抗氧化和生化指標(biāo)

試驗(yàn)第56天早上，每重復(fù)隨機(jī)選取2只雞，空腹翅靜脈采血，在4℃條件下3000r/min離心10min制備血清，-80℃保存。黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清超氧化物歧化酶（SOD），硫代巴比妥酸法測(cè)定血清丙二醛（MDA）含量，鉬酸鹽法測(cè)定過(guò)氧化氫酶（CAT），比色法測(cè)定谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）。血清中的葡萄糖、白蛋白、總蛋白、淀粉酶和脂肪酶含量均采用卓越300型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。上述指標(biāo)測(cè)定所用試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA）和獨(dú)立 樣本t檢驗(yàn)，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，多重比較用 Duncan´s 法，結(jié)果以平均值 ±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

3.1 生物發(fā)酵飼料對(duì)仙居雞產(chǎn)蛋性能的影響

影響蛋雞產(chǎn)蛋性能的因素很多，包括品種品系、個(gè)體差異、年齡、環(huán)境因素、生理階段、運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度、飼糧能量水平以及飼料添加劑等。茶渣中含有1%~2%的茶多酚，其所含有的兒茶素和黃酮類物質(zhì)對(duì)蛋雞的消化功能和雞蛋形成過(guò)程有積極影響，黃酮類物質(zhì)還可促進(jìn)母雞促黃體素雌激素和孕酮的分泌，從而使產(chǎn)蛋率升高。本試驗(yàn)中，向飼糧中添加4%發(fā)酵飼料代替豆粕可以使仙居雞的產(chǎn)蛋率提高4.92%，這與許多學(xué)者的研究結(jié)果一致。Xu等采用地衣芽孢桿菌發(fā)酵豆粕，日糧中添加2.5%發(fā)酵豆粕可以使蛋雞產(chǎn)蛋率提高3.59%。吳慧敏采用產(chǎn)朊假絲酵母、黑曲霉和枯草芽孢桿菌發(fā)酵綠茶茶渣，在蛋雞飼糧中添加2%發(fā)酵茶渣可以顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋性能。Yang等試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在蛋雞飼糧中添加4%和6%綠茶副產(chǎn)物可顯著提高產(chǎn)蛋率。

本試驗(yàn)中，各發(fā)酵飼料組間平均蛋重和死淘率差異均不顯著，這一結(jié)果與孫亞楠等和Azeke等的試驗(yàn)結(jié)果一致。而吳俊鋒等用發(fā)酵豆粕代替蛋雞飼糧中的豆粕，各組間死淘率差異不顯著，但處理組的平均蛋重高于對(duì)照組，這可能是因?yàn)榘l(fā)酵飼料及其添加量、蛋雞品種不同造成的差異。浙江仙居雞的平均蛋重一般在42g，但本試驗(yàn)的仙居雞的平均蛋重都低于42g，試驗(yàn)組較對(duì)照組有提高的趨勢(shì)。原因可能是本試驗(yàn)是在7月和8月進(jìn)行，天氣比較炎熱，導(dǎo)致仙居雞采食量下降，從而影響了蛋重，也可能是由于光照時(shí)間、溫度控制、通風(fēng)情況等環(huán)境因素導(dǎo)致的。另外，浙江省仙居雞一般采用放養(yǎng)，而本試驗(yàn)采用籠養(yǎng)，也可能導(dǎo)致仙居雞的平均蛋重低于42g。

劉媛媛用發(fā)酵豆粕代替肉雞飼糧中的豆粕，發(fā)現(xiàn)處理組肉雞整個(gè)生長(zhǎng)階段的耗料增重比較對(duì)照組降低了7.58%。這與本試驗(yàn)結(jié)果顯著降低了蛋雞的料蛋比一致。這主要源于酵母菌和枯草芽孢桿菌菌體含有有益營(yíng)養(yǎng)元素；其次，釀酒酵母、枯草芽孢桿菌和黑曲霉在代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生多種酶類和其他促生長(zhǎng)因子；而且飼料中的有益微生物可以抑制病原菌、維持腸道微生物穩(wěn)態(tài)，進(jìn)而增強(qiáng)蛋雞抗病力，促進(jìn)生長(zhǎng)。在整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)，添加發(fā)酵飼料可以降低仙居雞的破軟蛋率。

3.2 生物發(fā)酵飼料對(duì)仙居雞蛋品質(zhì)的影響

影響蛋雞蛋品質(zhì)的因素較多，除遺傳因素外，還受飼糧及蛋雞機(jī)體健康狀況的影響。本試驗(yàn)中，各組之間蛋形指數(shù)、蛋白比例、蛋黃比例和蛋殼比例并無(wú)差異，這是因?yàn)檫@4種指標(biāo)受遺傳因素影響較大。魏尊等研究也得到了相似的結(jié)果。蛋殼品質(zhì)的優(yōu)劣直接影響著蛋雞企業(yè)的利潤(rùn)。鈣、磷、鈉、鉀、鋅和錳是影響蛋殼品質(zhì)的主要營(yíng)養(yǎng)素，其中鋅和錳通過(guò)影響碳酸酐酶的活性和蛋殼粘多糖的合成而影響來(lái)影響蛋殼質(zhì)量。4%和6%發(fā)酵飼料組蛋殼厚度顯著高于對(duì)照組，這可能是由于發(fā)酵飼料中富含小肽等活性物質(zhì)，這些小肽可以促進(jìn)金屬離子的被動(dòng)吸收過(guò)程，從而增強(qiáng)了蛋殼厚度。也有一些研究與本試驗(yàn)結(jié)果不一致。張朝霞等和Kojima等發(fā)現(xiàn)在蛋雞飼糧中添加茶的副產(chǎn)品會(huì)導(dǎo)致蛋殼厚度顯著降低，Kaya等研究表明，隨著黑茶粉添加量的提高蛋殼厚度會(huì)逐漸下降。這可能是因?yàn)椴璺蹆?nèi)含有的單寧會(huì)阻礙鈣的吸收和利用。而在本試驗(yàn)中，茶渣經(jīng)過(guò)發(fā)酵后單寧含量可能比較低，這與朱飛等試驗(yàn)結(jié)果相似，黑曲霉固態(tài)發(fā)酵茶渣可顯著降低茶渣中的單寧含量。

蛋黃的色澤主要取決于飼糧中類胡蘿卜素和胡蘿卜素的含量。本試驗(yàn)中，3個(gè)處理組雞蛋蛋黃顏色均顯著提高，這可能是因?yàn)椴柙懈缓喾N色素的緣故。Abdo等也發(fā)現(xiàn)隨著綠茶添加量的提高，蛋黃顏色會(huì)隨之逐漸加深。

哈夫單位反映蛋白的狀況及雞蛋的新鮮程度，哈夫單位越高，代表蛋白越粘稠，雞蛋品質(zhì)越好。茶渣中含有的茶多酚具有極強(qiáng)的抗氧化能力，可以清除機(jī)體的自由基，降低對(duì)蛋白質(zhì)的損傷。本試驗(yàn)中，4%發(fā)酵飼料組雞蛋的蛋白高度提高，但是4%和6%發(fā)酵飼料組的哈夫單位均顯著高于對(duì)照組，這可能是因?yàn)殡u蛋重量不均勻所造成的。Biswas等和Xia等研究發(fā)現(xiàn)蛋雞飼糧中添加綠茶粉顯著提高了雞蛋的哈夫單位，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

3.3 生物發(fā)酵飼料對(duì)仙居雞血清抗氧化能力的影響

機(jī)體的健康程度與防御體系的抗氧化能力的強(qiáng)弱有著密切的聯(lián)系，正常機(jī)體的氧化損傷與抗氧化體系處于動(dòng)態(tài)平衡中，機(jī)體代謝產(chǎn)生的活性氧能不斷被機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)清除，以維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)。該防御體系包含多種具有抗氧化功能的酶類及非酶類物質(zhì)，如SOD、CAT、GSH-Px、維生素、氨基酸和金屬蛋白質(zhì)等。

動(dòng)物在代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化氫可以氧化機(jī)體的生物膜系統(tǒng)，從而對(duì)機(jī)體造成損傷。CAT的主要作用就是將過(guò)氧化氫分解為水和氧氣，從而減少其對(duì)動(dòng)物機(jī)體的傷害。綠茶含有的多酚類物質(zhì)具有潛在的抗氧化能力，豆粕含有的大豆異黃酮可以激活大鼠CAT的啟動(dòng)子，促進(jìn)CAT mRNA的表達(dá)，從而達(dá)到提高CAT活性，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力的目的。本試驗(yàn)中，添加發(fā)酵飼料的處理組CAT、SOD活性均顯著高于對(duì)照組，GSH-Px活性也有提高的趨勢(shì)，說(shuō)明飼料中添加發(fā)酵飼料可以增強(qiáng)仙居雞抗氧化能力。周玲玲等研究表明，發(fā)酵豆粕可以顯著增強(qiáng)仔豬血清GSH-Px活性；吳俊峰等發(fā)現(xiàn)，蛋雞飼糧中添加發(fā)酵豆粕可以提高其血清SOD活性。

機(jī)體代謝產(chǎn)生的自由基攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸，引起脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致機(jī)體組織受損。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，通常通過(guò)MDA含量反映動(dòng)物機(jī)體的脂質(zhì)過(guò)氧化程度，間接體現(xiàn)機(jī)體細(xì)胞受損傷程度。添加4%和6%發(fā)酵飼料于仙居雞飼糧中可以降低其血清中MDA含量，提高機(jī)體的抗氧化能力。陳慶達(dá)等向蛋雞飼糧中添加發(fā)酵豆粕，也得到了相似的結(jié)論。

3.4 生物發(fā)酵飼料對(duì)仙居雞血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)是衡量動(dòng)物健康狀況和生理機(jī)能等的重要指標(biāo)。動(dòng)物機(jī)體活動(dòng)所需要的能量大部分來(lái)源于葡萄糖，正常情況下蛋雞血液中葡萄糖穩(wěn)定在一定水平以保證機(jī)體能量的供給。本試驗(yàn)中，添加生物發(fā)酵飼料的處理組血清葡萄糖水平與對(duì)照組并無(wú)顯著差異，表明發(fā)酵飼料對(duì)仙居雞血清葡萄糖含量影響不大，與黃靜等向胡須雞中添加發(fā)酵桑葉粉并未顯著改變其血清葡萄糖水平的結(jié)果一致。

血清中的總蛋白是血清中白蛋白和球蛋白的總和。血清中總蛋白和白蛋白含量可反映機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況和蛋白質(zhì)的吸收與代謝狀況，其含量增加表明肝臟活動(dòng)增強(qiáng)，蛋白質(zhì)的合成代謝加強(qiáng)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中添加6%發(fā)酵飼料可以顯著提高仙居雞血清白蛋白水平，表明飼料中添加發(fā)酵豆粕可以提高蛋白質(zhì)在仙居雞體內(nèi)的沉積率，與郭軍蕊等在海蘭褐殼蛋雞中添加1.0×108CFU/g枯草芽孢桿菌可以顯著提高其血清白蛋白水平的結(jié)果一致。

本研究中，隨著發(fā)酵飼料添加量的提高，仙居雞血清總蛋白含量增加，但與對(duì)照組差異不顯著，與柯祥軍等向肉雞日糧中添加發(fā)酵豆粕可提高血清總蛋白含量的試驗(yàn)結(jié)果相似。消化酶是對(duì)消化道中食物降解有促進(jìn)作用的特殊蛋白質(zhì)，主要包括蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。動(dòng)物腸道中的消化酶活性反映其消化能力的強(qiáng)弱，決定了對(duì)飼料的利用效率。本試驗(yàn)中，發(fā)酵飼料組的淀粉酶和脂肪酶都有提高的趨勢(shì)，與林麗花等添加發(fā)酵豆粕可以提高肉雞的消化酶活性的結(jié)果一致。