摘要：為研究枯草芽孢桿菌(BS) 和木聚糖酶(XYL) 對(duì)瘤胃發(fā)酵、微生物酶活性和數(shù)量的影響。將20頭體重為(540+6.2) kg荷斯坦公牛按2x2因子設(shè)計(jì)隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(基礎(chǔ)日糧)、XYL+組 (基礎(chǔ)日糧+2 g/d XYL)、BS+組(基礎(chǔ)日糧+5 g/d BS)與XYL+BS組(基礎(chǔ)日糧+2 g/d XYL+5 g/d BS)。結(jié)果顯示:添加X(jué)YL，瘤胃pH不變;總揮發(fā)性脂肪酸濃度、乙酸摩爾比、乙酸/丙酸值增加(P<0.05) ;氨態(tài)氮濃度降低(P<0.05) ;纖維分解酶活性、總細(xì)菌和主要纖維分解菌數(shù)量提高(P<0.05) 。添加BS，瘤胃pH不變;總揮發(fā)性脂肪酸濃度和丙酸摩爾比增加(P<0.05) ;氨態(tài)氮濃度、纖維分解酶活性與菌數(shù)量不受影響。對(duì)瘤胃a-淀粉酶和蛋白酶活性以及嗜淀粉瘤胃桿菌與原蟲(chóng)數(shù)量，XYL與BS互作效應(yīng)顯著(P<0.05) 。綜上可知，XYL和BS均能改善瘤胃發(fā)酵，且二者共同添加對(duì)淀粉和蛋白分解菌的生長(zhǎng)與酶活性的提高更有效植物細(xì)胞壁約占飼草干物質(zhì)的40%~70%，由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等組成，其中由β-1,4葡萄糖聚合而成的纖維素約占細(xì)胞壁干物質(zhì)的30%以上，研究表明，即使在良好的飼喂條件下，反芻動(dòng)物對(duì)其消化率也低于65%，成為限制飼料利用率的主要因素。木聚糖酶(XYL) 是-種主要的纖維分解酶，通過(guò)水解β-1,4糖苷鍵， 破壞植物細(xì)胞壁。研究表明，外源纖維素酶能加快瘤胃纖維降解速度，使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松，釋放還原糖，從而增加微生物與飼料顆粒的結(jié)合位點(diǎn)，并為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)。奶牛日糧中添加復(fù)合纖維素酶，瘤胃總細(xì)菌數(shù)量增加;添加X(jué)YL，奶牛干物質(zhì)采食量、瘤胃總短鏈脂肪酸、乙酸、丙酸和丁酸產(chǎn)量增加，中性洗滌纖維瘤胃降解率提高。枯草芽孢桿菌(BS) 能形成對(duì)冷、熱、酸與堿具有強(qiáng)抵抗力的孢子，在日糧中具有很高的穩(wěn)定性，可以通過(guò)改善消化道的厭氧狀況而促進(jìn)厭氧菌的生長(zhǎng)。研究表明，在動(dòng)物消化道中BS的孢子能分泌具有活性的蛋白酶與淀粉酶;體外添加納豆芽孢桿菌(BS屬) 可促進(jìn)短鏈揮發(fā)性脂肪酸與丙酸的產(chǎn)生。此外，添加納豆芽孢桿菌可增加奶牛瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸濃度、丙酸摩爾比、蛋白分解菌與淀粉分解菌數(shù)量，提高乳與乳成分產(chǎn)量。現(xiàn)有研究表明，XYL與BS均有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在瘤胃的降解，但關(guān)于二者對(duì)瘤胃微生物數(shù)量與酶活性影響的研究還未見(jiàn)報(bào)道。基于XYL與BS在消化道的作用機(jī)制，二者共同添加比單獨(dú)添加對(duì)促進(jìn)反芻動(dòng)物瘤胃發(fā)酵與微生物的生長(zhǎng)應(yīng)該更有效。本試驗(yàn)通過(guò)在奶公牛日糧中添加X(jué)YL和BS，研究其對(duì)瘤胃發(fā)酵、微生物酶活性和數(shù)量的影響，以期為酶制劑與菌制劑在反芻動(dòng)物養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1、材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇體重(540士6.2) kg的荷斯坦奶公牛20頭，按照2x 2因子試驗(yàn)設(shè)計(jì),將試驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(基礎(chǔ)日糧)、XYL+組 (基礎(chǔ)日糧+2 g/dXYL)、BS+組(基礎(chǔ)日糧+5 g/d BS)與XYL+BS組(基礎(chǔ)日糧+2 g/dXYL+5 g/d BS)。基礎(chǔ)日糧依據(jù)NRC (2001)配制，精粗比為50:50 (見(jiàn)表1)。試驗(yàn)用XYL (活性5x104 U/g)和BS (1.6x109 CFU/g)由山西某生物工程股份有限公司提供。試驗(yàn)期為70 d,包括10 d預(yù)試期和60 d正試期。試驗(yàn)期間所有試驗(yàn)牛單槽飼養(yǎng)，每日飼喂兩次，自由采食與飲水。

1.2瘤胃液的采集與測(cè)定

正式試驗(yàn)期的第32 d和第60 d于晨飼后2 h通過(guò)胃管采集瘤胃液，為避免唾液的污染，最先采集的約200 mL要倒掉，收集接下來(lái)采集的約200mL,用PHS- 2C型酸度計(jì)測(cè)定pH后，四層紗布過(guò)濾，分裝，用于測(cè)定揮發(fā)性脂肪酸和氨態(tài)氮的樣品于-20 °C保存，用于測(cè)定微生物酶活性和數(shù)量的樣品保存于-80。C，各指標(biāo)具體測(cè)定及目標(biāo)微生物引物設(shè)計(jì)均依據(jù)Du等所用方法。

1.3數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)依據(jù)2x 2因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，數(shù)據(jù)采用SAS 9.0統(tǒng)計(jì)軟件中的混合模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2、結(jié)果與分析

2.1 XYL和BS對(duì)瘤胃發(fā)酵的影響(見(jiàn)表2)

由表2可知，日糧添加X(jué)YL或BS對(duì)瘤胃pH無(wú)顯著影響(P>0.05) ;總揮發(fā)性脂肪酸濃度顯著增加(P<0.05) 。日糧添加X(jué)YL，乙酸摩爾比與乙酸/丙酸顯著提高(P<0.05) ;丙酸摩爾比與氨態(tài)氮濃度顯著降低(P

2.2 XYL和BS對(duì)瘤胃微生物酶活性的影響(見(jiàn)表3)由表3可知，日糧添加X(jué)YL， 瘤胃羧甲基纖維素酶和漆酶活性無(wú)顯著變化(P>0.05) ;纖維二糖酶、木聚糖酶和果膠酶活性顯著提高(P<0.05) 。日糧添加BS，瘤胃羧甲基纖維素酶、纖維二糖酶、 木聚糖酶、果膠酶和漆酶活性均無(wú)顯著變化。對(duì)a-淀粉酶和蛋白酶活性，XYL和BS互作效應(yīng)顯著(P<0.05) :在添加X(jué)YL的日糧中添加BS，a- 淀粉酶和蛋白酶活性提高幅度顯著高于在無(wú)XYL日糧中添加BS ( P<0.05)。

2.3 XYL和BS對(duì)瘤胃菌群數(shù)量的影響(見(jiàn)表4)

由表4可知，日糧添加X(jué)YL，瘤胃總細(xì)菌、黃色瘤胃球菌、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌、溶纖維J酸弧菌和棲瘤胃普雷沃氏菌數(shù)量顯著增加(P<0.05) ;總真菌、總甲烷菌和白色瘤胃球菌數(shù)量無(wú)顯著變化。日糧添加BS, 瘤胃總細(xì)菌、總真菌、白色瘤胃球菌、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌、溶纖維J酸弧菌和棲瘤胃普雷沃氏菌數(shù)量無(wú)顯著變化;總甲烷菌數(shù)量顯著降低(P<0.05) ;黃色瘤胃球菌數(shù)量顯著增加(P<0.05) 。對(duì)瘤胃總原蟲(chóng)和嗜淀粉瘤胃桿菌數(shù)量，XYL和BS互作效應(yīng)顯著(P<0.05) :在XYL日糧中添加BS，原蟲(chóng)數(shù)量降低的幅度和嗜淀粉瘤胃桿菌數(shù)量增加的幅度顯著高于(P<0.05) 在無(wú)XYL日糧中添加BS。

3、討論

日糧中添加X(jué)YL，奶公牛瘤胃液pH的變化范圍為6.72~6.54，對(duì)瘤胃微生物的生長(zhǎng)無(wú)負(fù)面影響，而且瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸濃度的增加，表明添加X(jué)YL促進(jìn)了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在瘤胃的降解。日糧添加X(jué)YL，提高了乙酸摩爾比，降低了丙酸摩爾比，致使乙酸/丙酸升高，奶公牛瘤胃發(fā)酵類型轉(zhuǎn)變?yōu)橐宜岚l(fā)酵型，與瘤胃纖維二糖酶、 木聚糖酶和果膠酶活性提高，總原蟲(chóng)、黃色瘤胃球菌、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌和溶纖維丁酸弧菌數(shù)量增加的結(jié)果相一致。黃色瘤胃球菌、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌和溶纖維J酸弧菌為反芻動(dòng)物瘤胃中主要的纖維分解菌，他們與原蟲(chóng)和真菌相互配合，通過(guò)分泌纖維分解酶，將日糧結(jié)構(gòu)性碳水化合物降解為乙酸，其中在瘤胃中降解的約20%的纖維是由原蟲(chóng)完成的。

試驗(yàn)結(jié)果表明，XYL的添加不僅補(bǔ)充了奶公牛內(nèi)源酶的不足，還剌激了瘤胃纖維分解菌的生長(zhǎng)，提高了纖維分解酶的活性，進(jìn)而促進(jìn)了日糧纖維在瘤胃的降解。外源添加的XYL與瘤胃纖維素酶相互配合，水解β-1,4糖苷鍵,破壞植物細(xì)胞壁，釋放還原糖，為微生物的生長(zhǎng)提供了營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)增加了微生物與飼料顆粒的結(jié)合位點(diǎn)。已有的研究表明，奶牛日糧中添加纖維索酶，瘤胃總細(xì)菌與淀粉分解菌數(shù)量增加;添加X(jué)YL，奶牛瘤胃短鏈脂肪酸濃度與乙酸摩爾比增加，體外發(fā)酵總產(chǎn)氣量增加。然而，Phakachoed等 在以稻草為粗飼料的奶牛日糧中添加X(jué)YL，瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸濃度、乙酸、丙酸摩爾比以及乙酸/丙酸均未改變。日糧組成是決定反芻動(dòng)物瘤胃微生物生長(zhǎng)的最主要因素，因此，試驗(yàn)結(jié)果的差異與不同的日糧組成有關(guān)。本試驗(yàn)日糧添加X(jué)YL，奶公牛瘤胃丙酸摩爾比與氨態(tài)氮濃度均降低，與a淀粉酶和蛋白酶活性提高，溶纖維J酸弧菌、棲瘤胃普雷沃氏菌與嗜淀粉瘤胃桿菌數(shù)量增加的結(jié)果不一致。溶纖維J酸弧菌、棲瘤胃普雷沃氏菌與嗜淀粉瘤胃桿菌為反芻動(dòng)物瘤胃主要的淀粉與蛋白質(zhì)分解菌，能同時(shí)分泌淀粉酶與蛋白酶，將日糧非結(jié)構(gòu)性碳水化合物與蛋白質(zhì)分別降解為丙酸與氨態(tài)氮。但瘤胃原蟲(chóng)能吞噬淀粉顆粒，降低日糧淀粉在瘤胃中的降解速度，因此，丙酸摩爾比的降低與添加X(jué)YL后瘤胃原蟲(chóng)數(shù)量增加有關(guān)。蛋白質(zhì)在瘤胃中降解產(chǎn)生氨態(tài)氮、微生物，尤其是纖維分解菌，將其作為氮源，可發(fā)酵碳水化合物作為能源和碳架，合成微生物蛋白。木聚糖酶的添加使瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸濃度提高，總細(xì)菌與纖維分解菌數(shù)量增加，因此，氨態(tài)氨濃度的降低可能是由于更多的氮被轉(zhuǎn)化為微生物蛋白。

日糧添加BS，瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸濃度增加，表明飼料養(yǎng)分瘤胃降解率提高。添加BS后，乙酸摩爾比降低，但由總揮發(fā)性脂肪酸濃度乘以Z酸摩爾比計(jì)算可知，瘤胃乙酸濃度不變(BS-組和BS +組分別為61.8 mmol/L和59.1mmol/L)， 表明BS的添加對(duì)飼料纖維物質(zhì)在瘤胃的降解無(wú)影響。這一結(jié)果與沒(méi)有改變的羧甲基纖維索酶、纖維二糖酶、木聚糖酶、果膠酶和漆酶活性以及白色瘤胃球菌、產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌和溶纖維J酸弧菌數(shù)量相一致。丙酸摩爾比的增加可歸因于a-淀粉酶活性與嗜淀粉瘤胃桿菌數(shù)量的增加。支鏈脂肪酸由支鏈氨基酸在瘤胃中降解產(chǎn)生，因此，異丁酸和異戊酸摩爾比的增加主要是由于蛋白酶活性與嗜淀粉瘤胃桿菌數(shù)量的增加。試驗(yàn)結(jié)果表明BS的添加促進(jìn)了非結(jié)構(gòu)性碳水化合物與蛋白質(zhì)在瘤胃的降解。另?yè)?jù)報(bào)道，BS的孢子也可以產(chǎn)生淀粉酶和蛋白酶;納豆芽孢桿菌( BS屬)的添加促進(jìn)了瘤胃揮發(fā)性脂肪酸的產(chǎn)生，提高了丙酸摩爾比，增加了奶牛瘤胃蛋白分解菌與淀粉分解菌數(shù)量。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，日糧添加BS,瘤胃甲烷菌數(shù)量減少，這一結(jié)果與丙酸摩爾比的增加和原蟲(chóng)數(shù)量的減少有關(guān)。瘤胃甲烷菌利用氫和二氧化碳合成甲烷，丙酸的生成會(huì)消耗瘤胃中的氫，而原蟲(chóng)為甲烷菌的生長(zhǎng)提供棲息場(chǎng)所。Sun等研究發(fā)現(xiàn)，奶牛日糧中添加納豆芽孢桿菌，瘤胃原蟲(chóng)數(shù)量減少，但關(guān)于BS對(duì)瘤胃甲烷菌數(shù)量的研究還未見(jiàn)報(bào)道。對(duì)瘤胃a淀粉酶和蛋白酶活性，XYL 與BS互作效應(yīng)顯著，這一結(jié)果與觀察到的嗜淀粉瘤胃桿菌數(shù)量，XYL與BS互作效應(yīng)顯著相一致，表明XYL和BS共同添加比單獨(dú)添加更有助于反芻動(dòng)物瘤胃淀粉與蛋白分解菌的生長(zhǎng)，有利于淀粉與蛋白質(zhì)在瘤胃的降解，但出現(xiàn)該結(jié)果的機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

4、小結(jié)

日糧添加X(jué)YL能促進(jìn)瘤胃纖維分解菌的生長(zhǎng)，提高纖維分解酶的活力，使瘤胃發(fā)酵類型轉(zhuǎn)變?yōu)橐宜岚l(fā)酵型;日糧添加BS，瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸濃度與丙酸摩爾比增加;日糧同時(shí)添加X(jué)YL與BS較二者單獨(dú)添加更有助于瘤胃淀粉與蛋白分解菌的生長(zhǎng)以及酶活性的提高。

【原料組成】嗜酸乳桿菌、丁酸梭菌、復(fù)合氨基酸（過(guò)瘤胃賴氨酸和蛋氨酸等）、多種維生素、微量元素、復(fù)合酶制劑、免疫增強(qiáng)劑等。

【產(chǎn)品成分分析保證值】嗜酸乳桿菌、丁酸梭菌等合計(jì)≥10億cfu/g，維生素A100000-250000 IU，維生素D30000-100000 IU，煙酰胺≥500mg，生物素≥0.6mg，鐵1.0-10.5g，銅0.2-0.7g， 鋅1.0-2.4g，錳0.8-3.0，碘12.5-100mg，硒8.0-25mg，鈣10-20%，總磷≥12% ，氯化鈉10-20%，水分＜9.0%。

凈重：1000 克/袋。

【產(chǎn)品特點(diǎn)及功效】

1.針對(duì)母牛瘤胃消化生理特性設(shè)計(jì)產(chǎn)品，全面改善發(fā)酵內(nèi)環(huán)境，加快飼草分解能夠有效降解草料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，飼草中纖維素的細(xì)胞壁,充分釋放飼草營(yíng)養(yǎng)，飼草消化利用率，母牛繁殖性能明顯提高，奶水足牛犢生長(zhǎng)速度快。

2.營(yíng)養(yǎng)豐富并添加免疫增強(qiáng)劑,預(yù)防多種營(yíng)養(yǎng)缺乏癥有效提高母牛健康程度；含有特殊生理調(diào)控劑，促進(jìn)牛犢骨骼發(fā)育和生長(zhǎng)。母牛牛犢體格健壯，公牛運(yùn)用后健壯精液飽滿豐富等，健康程度明顯提高，節(jié)約大量用藥成本。

3.添加益生菌和酶制劑，可以讓養(yǎng)殖環(huán)境臭味下降。

4.添加特有調(diào)味劑，適口性極佳。 吸收好，消化好。富含反芻專用酶制劑和瘤胃調(diào)控劑，瘤胃內(nèi)，有效預(yù)防瘤胃酸中毒、瘤胃脹氣等，腸道健康問(wèn)題少稀便少發(fā)生。且牛被毛順滑光亮，體格健壯。

5.本產(chǎn)品是一般的母牛預(yù)混料的升級(jí)產(chǎn)品，增加了氨基酸、益生菌、酶制劑、免疫增強(qiáng)劑等，比一般預(yù)混料效果突出。且產(chǎn)品中不含任何動(dòng)物源性原料、無(wú)抗生素和其它違禁添加物，可以放心使用！

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每200公斤母牛、種公牛精補(bǔ)料中至少添加本品1包（1000克），最高可以增加4倍的使用量。精補(bǔ)料配方參考：玉米65%、豆粕（花生麩、菜粕等都可）15%、麥麩（酒糟、發(fā)酵豆渣、DDGS等均可）20%，哺乳期的母牛增加1%的小蘇打，1噸精補(bǔ)飼料中添加本品5包以上。

或者你現(xiàn)在的飼料和飼喂方式不變，每頭母牛、種公牛每天使用60-100克效果更佳突出。

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